长沙代妈应聘机构_安全靠谱代妈招聘，气相色谱仪测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的含量

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1.气相色谱法测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的原理：

样品经酸水解后提取脂肪，其中-亚麻酸、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)和二十二碳六烯酸(DHA)经酯交换反应生成甲酯，用气相色谱分离检测，保留时间表征，外标法定量。

二。气相色谱法测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的试剂和材料：

2.1氢氧化钾(KOH)。

2.2盐酸(HCl)。

2.3无水乙醚(C 2 H 5 OC 2 H 5)。

2.4乙醇(CH 3 CH 2 OH):体积分数 95%。

2.5石油醚：沸程30 ~ 60。

2.6正己烷(CH 3 (CH 2) 4 CH 3):色谱纯。

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2.7甲醇(CH 3 OH):色谱纯。

2.8无水硫酸钠(Na 2 SO 4)。

2.9试剂配制：氢氧化钾甲醇溶液(0.5 mol/L):称取2.8 g氢氧化钾，溶于甲醇中，定容至100 mL，混匀。

三。气相色谱法测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的标准溶液：

3.1标准：

3 . 1 . 1-亚麻酸甲酯(C 19 H 32 O 2):纯度 99.0%。

3.1.2 EPA甲酯(C 21 H 32 O 2):纯度 98.5%。

3.1.3 DPA甲酯(C 23 H 36 O 2):纯度 98.0%。

3.1.4 DHA甲酯(C 23 H 34 O 2):纯度 98.5%。

3.2标准溶液的制备：

3.2.1单一脂肪酸甲酯标准储备液(4.0 mg/mL):称取100.0mg亚麻酸甲酯、EPA甲酯、DPA甲酯和DHA甲酯标准物质于25.0 mL容量瓶中，分别溶解于正己烷中，定容至刻度，摇匀。该溶液应储存在-18的冰箱中。

3.2.2混合脂肪酸甲酯标准中间液(1.0 mg/mL):分别吸取2.50 mL脂肪酸甲酯标准储备液于10.0 mL容量瓶中，摇匀，这也是标准曲线的最高浓度，使用前配制。

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3.2.3脂肪酸甲酯标准工作溶液：分别吸取0.40 mL、0.80 mL、1.0 mL、2.0 mL和4.0mL脂肪酸甲酯中间溶液于10.0 mL容量瓶中，用正己烷定容，浓度为0.040 mg/mL、0.080 mg/mL、0.10 mg/mL和0.20mg/mL。

四。气相色谱法测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA含量的分析步骤：

4.1样品制备：

4.1.1样品处理：

4.1.1.1样品：称取0.5克~ 2克(精确至0.001克)粉碎混匀的待测样品(含待测组分约5毫克/克~ 10毫克/克)，加入8毫升水于50毫升比色管中，混匀后加入10毫升盐酸。

将比色管置于70 ~ 80水浴中，每隔5 min ~ 10 min用涡旋混合器混合。直到样品完全水解，大约需要40 min ~ 50 min。取出比色管，加入10 mL乙醇，混匀。冷却至室温后，将混合物转移至带塞的100 mL量筒中，用25 mL无水乙醚洗涤比色管数次，倒入量筒中。

用密塞振荡1分钟。加入25 mL石油醚，用密塞摇匀1 min，静置30min，分层，将吸出的有机层过滤到加有无水硫酸钠(约5 g)的浓缩瓶中。然后加入25 mL无水乙醚，密塞摇匀1 min，25 mL石油醚，密塞摇匀1 min，静置分层，将吸取的有机层用无水硫酸钠(约5g)过滤到浓缩瓶中，按“加入25 mL无水乙醚…，静置分层，过无水硫酸钠”重复操作一次，用旋转蒸发仪在45减压浓缩所有提取液至近干。将浓缩液在正己烷中溶解几次，转移至25 mL容量瓶中，定容，摇匀。根据步骤4.1.2进行甲酯化处理。

4.1.1.2油品：称取0.2g ~ 1g(精确至0.001 g)混合均匀的油品(含约10mg/g ~ 20mg/g待测组分)。)于25mL容量瓶中，加入5mL正己烷，轻轻摇动使其溶解，用正己烷定容至刻度，摇匀。根据步骤4.1.2进行甲酯化处理。

甲基化

吸取2.0 mL至10 mL待测液体(4.1.1.1，4.1.1.2)于带塞尺的试管中，加入2.0 ml氢氧化钾甲醇溶液，立即移至涡旋混合器中，摇匀5 min，静置5 min，加入6 mL蒸馏水，上下摇匀0.5 min，静置分层后，吸取下层液体。弃去后，用少量蒸馏水反复洗涤，用吸管弃去水层，直至洗至中性(若有机相有乳化现象，4000 r/min离心10 min)，吸取正己烷层在电脑上测试。

5.气相色谱法测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的色谱条件：

色谱柱：键合交联聚乙二醇固定相，柱长30米，内径0.32毫米，膜厚0.5米或相当。

柱温箱温度：初始温度180，以10 /min升温至220，然后以8 /min升温至250，保温13 min。

进样口温度：250；注射量为1 L，分流比为201。

FID检测器温度：270。

载气：高纯氮气，流速1.0毫升/分钟，尾吹25毫升/分钟。

氢气：40毫升/分钟；空气流速为450毫升/分钟。

六。气相色谱法测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA结果的计算：

最好不要同房，避免情绪激动导致卵泡过早排出。因为因小失大，在九州看到试管婴儿期间尽量不要同房，移植后三个月也不能同房，因为这期间不稳定。注意休息，均衡营养。

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